Способ получения системы доставки фрагментов нуклеиновых кислот в клетки млекопитающих
Patents
Language: |
Русский |
Type: |
Invention |
Number |
RU 2646113 C1 |
Request number: |
2016136040 |
Request date: |
Sep 6, 2016 |
patent.field.start_date: |
Sep 6, 2016 |
Registration date: |
Mar 1, 2018 |
patent.field.request_publication_date: |
|
Authors |
Zarytova Valentina Filippovna
,
Levina Asya Saulovna
,
Repkova Marina Nikolaevna
,
Ismagilov Zinfer Rishatovich
,
Shikina Nadezhda Vasilʹevna
,
Tatarova Lyudmila E.
,
Mazurkova Natalʹya Alekseevna
|
Affiliations |
1 |
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН)
|
2 |
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт катализа им. Г.К. Борескова Сибирского отделения Российской академии наук (ИК СО РАН)
|
|
Изобретение относится к области молекулярной биологии, биоорганической химии и медицины. Предложен способ получения системы доставки фрагментов нуклеиновых кислот (ФНК) в клетки млекопитающих. Осуществляют синтез основы для доставки ФНК. В качестве основы используют аминозамещенный силанол (Si~NH2) в концентрации 1-4 мг Si/мл. Si~NH2 получают гидролизом в воде аминопропилтриэтоксисилана при рН 10-11 и температуре 20-70°С с последующей нейтрализацией силанола 0,5-1%-ным раствором уксусной кислоты до рН 8-9. К полученному раствору Si~NH2 добавляют рассчитанное количество 10-3-10-7 М раствора соответствующего ФНК в соотношении 5-100 нмоль ФНК на 1 мг Si и инкубируют в 0,1-0,2 М растворе NaCl при комнатной температуре в течение 20-30 мин. Получают систему доставки ФНК в клетки, представляющую собой композит Si~NH2⋅ФHK с емкостью по ФНК 10-100 нмоль/мг Si, обладающий высокой прочностью связывания олигонуклеотида с основой, способностью проникать через клеточную мембрану и низкой цитотоксичностью. 3 ил., 10 пр.
FIELD: biotechnology.
SUBSTANCE: method for making a system of delivery of nucleic acid fragments (NAF) to mammalian cells is provided. The base for the delivery of NAF is synthesized. Amine-substituted silanol (Si~NH) at a concentration of 1-4 mg Si/ml is used as the base. Si~NHis obtained by hydrolysis in water of aminopropyltriethoxysilane at a pH value of 10-11 and temperature of 20-70°C followed by neutralisation of silanol with a 0.5-1% solution of acetic acid to a pH value of 8-9. The resulting solution of Si~NHis added with the calculated number of 10-10M of the corresponding NAF solution in the ratio of 5-100 nmol of NAF per 1 mg of Si and incubated in 0.1-0.2 M of NaCl at room temperature for 20-30 min. A system of delivery of NAF to cells is made. It is a composite of Si~NH⋅NAF with a NAF capacity of 10-100 nmol/mg of Si.
EFFECT: high strength of binding of oligonucleotide with the base, ability to penetrate through the cell membrane and low cytotoxicity.
3 dwg, 10 ex